(Flow cytometry , FCM ) ایک سیل اینالائزر ہے جو داغدار سیل مارکر کی فلوروسینس شدت کی پیمائش کرتا ہے۔یہ ایک ہائی ٹیک ٹیکنالوجی ہے جو واحد خلیات کے تجزیہ اور چھانٹی پر مبنی ہے۔یہ تیزی سے سائز، اندرونی ساخت، ڈی این اے، آر این اے، پروٹین، اینٹیجنز اور خلیات کی دیگر جسمانی یا کیمیائی خصوصیات کی پیمائش اور درجہ بندی کر سکتا ہے، اور ان درجہ بندیوں کے مجموعہ پر مبنی ہو سکتا ہے۔
فلو سائٹو میٹر بنیادی طور پر درج ذیل پانچ حصوں پر مشتمل ہوتا ہے۔
1 فلو چیمبر اور فلوڈیکس سسٹم
2 لیزر لائٹ سورس اور بیم کی تشکیل کا نظام
3 آپٹیکل سسٹم
4 الیکٹرانکس، اسٹوریج، ڈسپلے اور تجزیہ کا نظام
5 سیل چھانٹنے کا نظام
ان میں سے، لیزر لائٹ سورس اور بیم بنانے کے نظام میں لیزر کی حوصلہ افزائی فلو سائٹومیٹری میں فلوروسینس سگنلز کی اہم پیمائش ہے۔جوش کی روشنی کی شدت اور نمائش کا وقت فلوروسینس سگنل کی شدت سے متعلق ہے۔لیزر ایک مربوط روشنی کا ذریعہ ہے جو واحد طول موج، اعلی شدت، اور اعلی استحکام کی روشنی فراہم کر سکتا ہے۔یہ ان ضروریات کو پورا کرنے کے لئے مثالی حوصلہ افزائی روشنی کا ذریعہ ہے.
لیزر سورس اور فلو چیمبر کے درمیان دو بیلناکار لینز ہیں۔یہ لینس ایک لیزر بیم پر توجہ مرکوز کرتے ہیں جس میں ایک سرکلر کراس سیکشن ہوتا ہے جو لیزر سورس سے ایک چھوٹے کراس سیکشن (22 μm × 66 μm) کے ساتھ بیضوی بیم میں خارج ہوتا ہے۔اس بیضوی شعاع کے اندر لیزر توانائی کو ایک عام تقسیم کے مطابق تقسیم کیا جاتا ہے، جس سے لیزر کا پتہ لگانے والے علاقے سے گزرنے والے خلیات کے لیے مسلسل روشنی کی شدت کو یقینی بنایا جاتا ہے۔دوسری طرف، آپٹیکل سسٹم لینز، پن ہولز اور فلٹرز کے متعدد سیٹوں پر مشتمل ہوتا ہے، جنہیں تقریباً دو گروپوں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے: فلو چیمبر کے اوپر اور نیچے کی طرف۔
فلو چیمبر کے سامنے آپٹیکل سسٹم ایک لینس اور پن ہول پر مشتمل ہوتا ہے۔لینس اور پن ہول (عام طور پر دو لینز اور ایک پن ہول) کا بنیادی کام لیزر بیم کو ایک سرکلر کراس سیکشن کے ساتھ فوکس کرنا ہے جو لیزر سورس کے ذریعے خارج ہونے والے ایک چھوٹے کراس سیکشن کے ساتھ بیضوی بیم میں ہوتا ہے۔یہ لیزر توانائی کو عام تقسیم کے مطابق تقسیم کرتا ہے، لیزر کا پتہ لگانے والے علاقے میں خلیات کے لیے مسلسل روشنی کی شدت کو یقینی بناتا ہے اور آوارہ روشنی سے مداخلت کو کم کرتا ہے۔
فلٹرز کی تین اہم اقسام ہیں:
1: لانگ پاس فلٹر (LPF) - صرف ایک مخصوص قدر سے زیادہ طول موج والی روشنی کو گزرنے دیتا ہے۔
2: شارٹ پاس فلٹر (SPF) - صرف ایک مخصوص قدر سے کم طول موج والی روشنی کو گزرنے دیتا ہے۔
3: بینڈ پاس فلٹر (BPF) - صرف ایک مخصوص طول موج کی حد میں روشنی کو گزرنے دیتا ہے۔
فلٹرز کے مختلف امتزاج مختلف طول موج پر فلوروسینس سگنلز کو انفرادی فوٹوملٹیپلائر ٹیوبوں (PMTs) کی طرف لے جا سکتے ہیں۔مثال کے طور پر، PMT کے سامنے گرین فلوروسینس (FITC) کا پتہ لگانے کے لیے فلٹرز LPF550 اور BPF525 ہیں۔PMT کے سامنے نارنجی سرخ فلوروسینس (PE) کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہونے والے فلٹرز LPF600 اور BPF575 ہیں۔PMT کے سامنے سرخ فلوروسینس (CY5) کا پتہ لگانے کے فلٹرز LPF650 اور BPF675 ہیں۔
فلو سائٹومیٹری بنیادی طور پر سیل چھانٹنے کے لیے استعمال ہوتی ہے۔کمپیوٹر ٹیکنالوجی کی ترقی، امیونولوجی کی ترقی اور مونوکلونل اینٹی باڈی ٹکنالوجی کی ایجاد کے ساتھ، حیاتیات، طب، فارمیسی اور دیگر شعبوں میں اس کا اطلاق تیزی سے ہوتا جا رہا ہے۔ان ایپلی کیشنز میں سیل ڈائنامکس کا تجزیہ، سیل اپوپٹوسس، سیل ٹائپنگ، ٹیومر کی تشخیص، منشیات کی افادیت کا تجزیہ وغیرہ شامل ہیں۔
پوسٹ ٹائم: ستمبر 21-2023
